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技術文章
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介紹幾種常見的細胞轉染方法
2022-09-28
細胞轉染技術主要分為三大類：化學法、物理法及生物學法。但是沒有一種方法是放之四海而皆準的，即沒有任何方法適用于所有細胞和所有實驗。因而只有依據自己的實驗要求選擇理想的方法，才能獲得漂亮的實驗結果。下面介紹幾種常見的細胞轉染方法：1、DEAE-右旋糖苷法常言道：同性相斥，異性相吸。因而，當帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負電的磷酸骨架相遇，妥妥的火花四射，而后會被細胞膜抱團相擁并通過細胞內吞作用迎客到家。該法可用于瞬時轉染，操作相對簡單、結果可重復，但是對細胞有一定的毒副作...
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分析影響細胞轉染效率的因素
2022-09-27
細胞轉染指的是將外源分子如DNA、RNA等導入到真核細胞內部的技術。隨著基因和蛋白功能研究的深入，轉染已經成為科研實驗中常用的技術手段之一。對于細胞轉染實驗，轉染試劑、轉染方法、細胞狀態(tài)等都會影響到細胞轉染的效率，本文主要對影響細胞轉染效率的8個因素做一介紹。1.轉染試劑瞬時轉染和穩(wěn)定轉染可以選擇不同的轉染試劑，轉染試劑的選擇又可以根據已經發(fā)表的文獻，已經有很多細胞株被成功轉染，通過文獻資料可以參考最適的轉染試劑，當然也要根據不同的實驗需求選擇。一般來說轉染試劑的要求是低毒，...
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胎牛血清使用中的常見問題解答
2022-09-19
1、如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。2、血清中包含絮狀...
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提高細胞轉染效率的方法有哪些？
2022-09-15
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學介導方法：如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法：有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化...
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介紹細胞凍存的主要步驟
2022-09-13
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透...
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原代細胞轉染的實驗操作要注意的事項
2022-09-06
原代細胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫(yī)藥產業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉...
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選擇真核細胞轉染試劑要考慮哪些因素
2022-08-30
轉染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導入細胞的過程。采用各種化學、生物學或物理方法導入外源性核酸會改變細胞的特性,從而實現細胞基因功能和蛋白質表達研究。轉染后,導入的核酸可以瞬時性地存在于細胞內,只表達一段時間且不會復制,也可以穩(wěn)定地整合至受體基因組內,隨著宿主基因組的復制而復制,各種基因輸送系統采用的術語與該領域的技術進展步調一致,并進一步區(qū)分不同的方法和細胞類型。轉染技術作為一種分析工具，可將外源基因導入真核細胞，有助于機體表征遺傳、蛋白質合成、細...
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影響細胞轉染效率的因素有哪些？
2022-08-19
細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。影響細胞轉染效率的因素有哪些？1.轉染試劑的選擇不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選...
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